Контроль бактериальных эндотоксинов активной фармацевтической субстанции Циклофосфамида моногидрат

ВВЕДЕНИЕ……………………………………………………………......... 4
Актуальность темы исследования.......................................................................4
Цель исследования ................................................................................................5
Материалы и методы исследования.....................................................................6
Практическая значимость.....................................................................................7
Структура работы..................................................................................................7
ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ.............................................................................................8
Метод гель-тромб тест..........................................................................................8
Мешающие факторы.............................................................................................9
Основы пробоподготовки....................................................................................9
Выбор растворителя для субстанции.................................................................10
Основные расчеты для исследования.................................................................16
Подтверждение заявленной чувствительности.................................................17
Обоснование метода корректировки рН............................................................22
Определение рабочего разведения для мешающих факторов.........................24
Результаты исследования....................................................................................30
Подготовка растворов к испытанию «Мешающие факторы»..........................32
Результаты «Мешающих факторов»..................................................................36
ЗАКЛЮЧЕНИЕ...................................................................................................38
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ...................................................................................40

Весь текст будет доступен после покупки

Актуальность исследования состоит в обеспечении безопасности лекарственных средств путем контроля содержания бактериальных эндотоксинов. Требования к содержанию этих эндотоксинов в фармацевтических субстанциях для производства стерильных лекарственных препаратов являются важными для обеспечения безопасности их применения. Не только апирогенные субстанции, но также микробиологическая чистота, используемая для производства инъекционных лекарственных препаратов, должны контролироваться на наличие бактериальных эндотоксинов через ЛАЛ-тест или тест на пирогенность.

Оценка данного показателя проводится в соответствии с требованиями указанной фармакопейной статьи "Бактериальные эндотоксины" ГФ IV РФ, где содержатся основные методические указания для анализа препаратов на содержание бактериальных эндотоксинов.

Тем не менее, данная фармакопейная статья не содержит подробных рекомендаций относительно условий подготовки проб образцов, что оказывает значительное влияние на проведение ЛАЛ-теста, особенно для фармацевтических субстанций. Это усложняет процедуру определения бактериальных эндотоксинов, особенно в случаях, когда субстанции растворимы в воде или содержат факторы, которые могут помешать ферментативной реакции эндотоксинов с ТАЛ-реактивом, такие как хелатирование, денатурация белка или адсорбция эндотоксина.

Весь текст будет доступен после покупки

Основная часть
Метод гель-тромб тест
Характеристика ТАЛ реактива
Лизат амебоцитов Tachypleus (TAL) - это водный экстракт крови китайского мечехвоста (Tachypleus tridentatus). В нем содержится каскад ферментов (сериновых протеаз), которые могут быть активированы бактериальными эндотоксинами. Эндотоксины активируют проферменты, образуя активированные ферменты (коагулазы). Они в свою очередь активируют коагулоген, который превращается в коагулин, образуя студенистый гель. Если концентрация эндотоксинов достаточно высока, образующийся гель будет плотным и останется неподвижным при переворачивании пробирки. Это означает положительный результат, указывающий на высокую концентрацию эндотоксинов в образце. Если гель не образуется, результат считается отрицательным, что указывает на низкую концентрацию эндотоксинов.

Лиофилизированный ТАЛ-реактив - это стабилизированный моно- и дивалентными катионами экстракт амебоцитов Tachypleus tridentatus. Чувствительность реактива указывается на этикетке флакона и представляет собой минимальную концентрацию эндотоксина, необходимую для образования геля в стандартных условиях.

Контрольный стандарт эндотоксина (КСЭ) используется для контроля реакции ТАЛ-реактива при проведении анализов и валидации методик. КСЭ калибруется по Международному стандарту (МС) и используется для оценки активности ряда КСЭ.

Гель-тромб тест является простым и экономичным методом для выявления наличия и определения концентрации эндотоксинов. Он хорошо воспроизводим и требует минимального оборудования. При проведении теста смешивают равное количество ТАЛ-реактива и препарата. Затем их инкубируют при температуре 37°C в течение 60 минут. Диапазон обнаружения эндотоксина при этом методе составляет от 0,01 до 0,03 ЕЭ/мл. Гель-тромб тест является основным методом для выявления наличия и определения концентрации эндотоксинов.

Весь текст будет доступен после покупки

1. Байдуйсенова А.У. Особенности испытаний лекарственных средств на наличие бактериальных эндотоксинов. Доцент, научная статья;
2. British Pharmacopeia. London, 2017. Британская Фармакопея, Лондон 2017 г.;
3. Проведение анализа «Мешающие факторы» Бюллетень «ЛАЛ-тест» №2 (7) 2004.;
4. ГОСТ Р ИСО 29701- 2015 НАНОТЕХНОЛОГИИ Наноматериалы для испытаний в тест-системах in vitro. Метод определения содержания эндотоксинов с использованием лизата амебоцитов Limulus (Л АЛ-тест) (ISO 29701:2010, ЮТ) Москва, Стандартинформ 2016, - 20с.;
5. Государственная Фармакопея Российской Федерации XIV издание Том I, Москва 2018 ОФС.1.2.4.0006.15 «Бактериальные эндотоксины»;
6. Европейская Фармакопея 8.0-е издание от 15.07.2013 часть 01/2010:20614 исправлено 7.0-е издание 1 2.6.14. «Бактериальные эндотоксины»;
7. Исрафилов А.Г., Тутнова А.Д. Информационный анализ методик пробоподготовки испытуемых образцов для определения бактерийных эндотоксинов по ОФС.1.2.4.0006.15 «Бактериальные эндотоксины» Заведующий лабораторией вирусных препаратов филиал «Иммунопрепарат» г.Уфа АО «НПО «Микроген»; Старший специалист по клеточным технологиям ООО «Альгимед»;
8. Копицына М. Н., Морозов А. С, Бессонов И. В., Писарев В. М. Методы определения бактериального эндотоксина в медицине критических состояний (обзор). АО Перспективные медицинские технологии, Россия, 119234, г. Москва, Ленинские горы, д. 1/75Г 2 НИИ общей реаниматологии им. В. А. Неговского ФНКЦ реаниматологии и реабилитологии, Россия, 107031, г. Москва, ул. Петровка, д. 25, стр. 2 3 Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии Роспотребнадзора, Россия, г. Москва, ул. Новогиреевская, д. 4 -12 с.;

Весь текст будет доступен после покупки