Применение растворов гидролизата мышечной ткани норок, как альтернатива сыворотке КРС при культуральных работах

Принятые сокращения……………………………………………………………….4
Введение………………………………………………………………………………5
Актуальность проблемы……………………………………………………………5
Цель и задачи……………………………………………………………………….7
1 Обзор литературы………………………………………………………………...8
1.1 Культивирование клеточных культур. Питательные среды………………8
1.1.1 Классификация питательных сред…………..…………………………….8
1.1.2 Компоненты питательной среды…………………………………………10
1.2 Сыворотка крови КРС………………....……………………………………16
1.2.1 Компоненты сыворотки КРС…………………………………………......16
1.2.2 Функции сыворотки КРС…………………………………………………17
1.2.3 Влияние сывороток крови КРС, полученных от животных разных возрастов, используемых в составе питательных сред при культивировании клеток……………………………………………..........17
1.2.4 Недостатки использования сыворотки КРС……………………………..18
1.3 Альтернативы сыворотке КРС………………………………………………..20
1.3.1 Лизат тромбоцитов человека (HPL)……………………………………...24
1.3.2 Белок серицин……………………………………………………………...27
1.3.3 Глазная жидкость КРС…………………………………………………….28
1.3.4 Химически определённые среды…………………………………………29
1.3.5 Целомическая жидкость дождевого червя, инактивированная
нагреванием (HI-CF)…………………………………………………………….29
1.3.6 Гидролизаты……………………………………………………………….31
2 Материалы и методы……………………………………………………………...39
2.1 Материалы……………………………………………………………………..39
2.1.1 Культура клеток…………………………………………………………...39
2.1.2 Гидролизат из мышечной ткани норок…………………………………..39
2.1.3 Культуральная среда……………………………………………………...39
2.1.4 Диспергирующая среда…………………………………………………...40
2.1.5 Культуральные планшеты………………………………………………40
2.1.6 Автоматические дозаторы и наконечники ………………………...…..40
2.1.7 Микроскоп ……………………………………………………………….40
2.1.8 Термостат…………………………………………………………………40
2.1.9 Автоклав…………………………………………………………………..41
2.1.10 Холодильник…………………………………………………………….41
2.1.11 Фильтр для стерилизации………………………………………………41
2.2 Методы………………………………………………………………………..41
2.2.1 Методы стерилизации…………………………………………………...41
2.2.2 Приготовление раствора гидролизата мышечной ткани норок различных концентраций……………………………………………………………...42
2.2.3Методика пассажа адгезионных клеточных культур…….……...………42
2.2.4 Подсчёт клеток с использованием камеры Горяева…………………….43
3 Результаты собственных исследований…………………………………….....45
4 Обсуждение результатов………………………………………………….……50
5 Выводы……………………………………………………………………….….52
6 Заключение………………………………………………………………….…..53
7 Список литературы …………………………………………………………….54

Весь текст будет доступен после покупки

Клеточные культуры нашли своё применение в самых различных областях биологии, медицины и сельского хозяйства. Использование клеточных культур, как модельных систем, позволяет дать ответы на вопросы, связанные с выяснением механизмов дифференцировки и пролиферации клеток, взаимодействием клеток со средой, адаптацией, биологической подвижностью, старением, злокачественной трансформацией и др. Клеточные культуры широко используются в биотехнологии при производстве вакцин и биологически активных веществ. За долгую историю применения клеточных культур в научных исследованиях и биофармацевтической промышленности разработано множество типов питательных сред. Одним из острых вопросов, связанным с технологией культивирования клеток, является снижение затрат на производство питательных сред.
Важным компонентом питательной среды является сыворотка крови КРС, которая служит источником аминокислот, липидов, белков, факторов роста и гормонов. В то же время использование сыворотки неблагоприятно из-за ее высокой стоимости, различий в составе от партии к партии и потенциального риска микробного загрязнения. Постепенно предпринимаются усилия по замене сыворотки более доступными аналогами, одними из которых являются гидролизаты.
Гидролизаты - продукты переработки растительных (соя, горох, рис, рапс и т.д.) или животных (курица, свинина, рыба и т.д.) белков после гидролиза кислотой, щелочью, ферментами. Гидролизаты являются многокомпонентными продуктами. Они содержат аминокислоты, углеводы, минералы, белки, липиды, обеспечивающие клетки животных разнообразным источником питательных веществ с потенциальными полезными эффектами, выходящими за рамки питательной ценности [68]. Применение гидролизатов может стать перспективной заменой сыворотке.

Весь текст будет доступен после покупки

1 Обзор литературы

1.1 Культивирование клеточных культур. Питательные среды

Культивирование клеточных культур – это процесс, при котором отдельные клетки прокариот или эукариот выращиваются в искусственно контролируемых условиях. При культивировании клеток различных клеточных линий необходимо обеспечить поддержание правильного температурного режима, влажности, осмотического давления, регулирование содержания СО2 в вентилируемом воздухе, а также правильный подбор питательной среды.
Питательные среды – это многокомпонентные жидкости или плотные гели, созданные специально для выращивания клеток разного типа. В их состав входят различные аминокислоты, соли, витамины, гормоны и факторы роста. Питательная среда должна содержать все необходимые питательные компоненты в легкоусвояемой форме, быть изотонической, сбалансированной и имеющей высокую буферную емкость [8].
1.1.1 Классификация питательных сред
Питательные среды классифицируют по назначению на ростовые и
поддерживающие:
1) ростовые среды обеспечивают активное размножение клеток в процессе формирования монослоя либо в процессе суспензионного культивирования [9]
2) поддерживающие среды предназначены для сохранения клеток в уже сформировавшемся монослое или определенной концентрации клеток в суспензии [9]

Весь текст будет доступен после покупки

1. Антибиотики и антимикотики в биологической науке: сайт. – URL: https:// https://catrosa.ru/docs/pdf_AppliChem/No16_Antibiotika_AC_RU.pdf (дата обращения: 07.11.2023);
2. Байтулакова А. Ф. Изучение поддерживающих культур клеток свойств питательной среды из гидролизата белков гороха для биотехнологических целей / А. Ф. Байтулакова, М. Т. Велямов // Алматы : Новости науки Казахстана. – 2017. – №. 3. – С. 141-155;
3. Богрянцева М. П. Технология изготовления и свойства питательной среды сухой стерильной на основе гидролизатов : дис. канд. биол. наук:
03.00.23. – Кольцово, 1999. – 191 с;

4. Гуславский, А. И. Перспективы применения сыворотки крови северных оленей в клеточной биотехнологии / А. И. Гуславский, А. В. Канарский, З. А. Канарская // Вестник Казанского технологического университета. – 2013. – Т. 16, 4. – С. 192-194. – EDN PXDDJL.
5. Зеленов А.Е. Сыворотка крови северных оленей / А. Е. Зеленов, И. Г. Коромыслов, Ю. И. Могильный [и др.] // Ветеринария. – 2013. – № 1. – С. 62-63. – EDN OGKQKC.
6. Патент № 2673718 Российская Федерация, МПК C12N 1/20., Питательная среда для культивирования перевиваемых клеточных линий млекопитающих : № 2018102493 : заявл. 2018.01.22 : опубл. 2018.11.29 / Генералов С. В. [и др.]. – 8 с;
7. Патент № 2804076 Российская Федерация, МПК C12N 1/00. Питательная среда для культивирования перевиваемых культур клеток : № 2022129367: заявл. 11.11.2022 : опубл. 26.09.2023 / В. Н. Денисенко, Л. А. Гнездилова, А. И. Албулов [и др.] Стерилизующая фильтрация – что это и зачем нужно : сайт. – URL: https://millab.ru/press-tsentr/sterilizuyushchaya-filtratsiya/ (дата обращения: 07.11.2023);
8. Трухан И. С. Питательная среда как ключевой фактор культивирования клеток млекопитающих / И. С. Трухан // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. – 2018. – №. 12-1. – С. 165-172;
9. Физиолого-биохимические основы культивирования клеток животных и человека: сайт. – URL: https:// www.bio.bsu.by/fbr/files/10_cell_euk_cultures.pdf (дата обращения: 07.11.2023);
10. Юшин Ю. В. Обзор питательных сред, используемых для культивации рекомбинантной Escherichia coli / Ю. В. Юшин, Р. В. Подкопайло, Д. А. Петрова, К. А. Егоров, В. П. Трухин // Медицина экстремальных ситуаций. – 2019. – Т. 21. – №. 3. – С. 444-453;

Весь текст будет доступен после покупки