ОСОБЕННОСТИ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ У ДОНОРОВ КРОВИ НА ПРИМЕРЕ ПРИМЕНЕНИЯ МЕТОДОВ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ И ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА

Введение ………….….….….….….….….……….….……..….…...…….……… 3
Глава 1. Обзор литературы …………………………………………….………... 6
1.1. Гемотрансмиссивные инфекции, их значение и риск инфицирования до-норской крови ……………………….…………………………............................ 6
1.2. Нормативные документы по обеспечению инфекционной безопасности при переливаниях компонентов крови .……………………..………………… 13
1.3. Методы выявления маркеров вирусных инфекций ….………………..… 14
1.4. Технология карантинизации донорской крови ……..………………….… 22
Глава 2. Материалы и методы исследования ………………….……………... 24
2.1. Материалы для скрининга, требования к донорской крови …………….. 24
2.2. Лабораторные скрининговые и подтверждающие методы исследований донорской крови ………………………………………………………….….…. 26
2.3. Математико-статистический анализ данных …………………….…….… 36
Глава 3. Полученные результаты исследования и их обсуждение ………..… 38
Выводы ………..……………………………………………………………….... 43
Список использованных источников …………………………..…….……….. 44

Весь текст будет доступен после покупки

В настоящее время приоритетными задачами службы крови в Россий-ской Федерации является объем и качество заготавливаемой донорской крови и ее компонентов для удовлетворения потребностей здравоохранения. Для инфекционной безопасности донорской крови в России применяется регламентированная практика гемотрансфузионной терапии: программа добровольного донорства, введение единых баз доноров, карантинизация донорской крови и ее компонентов, а также применение комплекса лабораторной диагностики. ВИЧ-инфекция и вирусные гепатиты С и В, представляют наибольшую опасность для гемотрансфузиологии [ФЗ РФ от 20.07.2012 г. № 125-ФЗ].
Актуальность темы магистерской диссертации обусловлена высокой степенью распространенности вирусных гепатитов и вируса иммунодефици-та человека, что в свою очередь несет потенциальную опасность как для здоровья реципиента, так и для инфекционной безопасности страны в целом. В современной лабораторно-диагностической практике, лежит оптимальная комбинация различных методов диагностики, позволяющие нивелировать качество и достоверность каждого отдельного исследования.
В ходе скрининга донорской крови на маркеры гемотрансмиссивных инфекций, встречаются случаи расхождения положительных результатов иммуноферментного анализа и полимеразной цепной реакции, что в даль-нейшем также не находит подтверждения в референс-лаборатории, тем са-мым делает их ложноположительными.
Объект исследования: методы полимеразной цепной реакции и имму-ноферментного анализа, используемые при проведении лабораторной диа-гностики вирусных инфекций в донорской крови.
Предмет научного исследования: результативность методов полиме-разной цепной реакции и иммуноферментного анализа при проведении лабораторной диагностики вирусных инфекций в донорской крови.
Цель исследования: выявить зависимость встречаемости положитель-ных результатов скрининга донорской крови от метода лабораторной диагностики.
Для достижения поставленной цели исследования, были реализованы следующие задачи:
1) провести анализ образцов донорской крови методами иммунофер-ментного анализа и полимеразной цепной реакции за 2020-2021 гг.;
2) изучить зависимость результата от метода диагностики с помощью модели биноминальной логистической регрессии;
3) на основе полученных результатов, предложить рекомендации по оптимизации диагностического процесса донорской крови.
Новизна научного исследования заключатся в зависимости встречаемости положительных результатов скрининга донорской крови при использовании иммуноферментного анализа и полимеразной цепной реакции, как комплекса диагностических мер. На основе регрессионного анализа были получены результаты скрининговых исследований, определяющие влияние оптимизации диагностического процесса на качество аналитического этапа лабораторного исследования.
Методы исследования:
1. Метод иммуноферментного анализа для выявления поверхностного антигена вируса гепатита В.
2. Метод иммуноферментного анализа для выявления антител к вирусу гепатита С.
3. Метод иммуноферментного анализа одновременного определения антител к ВИЧ ? и антигена ВИЧ 1 Р24.
4. Метод полимеразной цепной реакции одновременного выявления РНК вируса гепатита С, ДНК вируса гепатита В, и РНК ВИЧ.
5. Математико-статистический анализ данных.
Теоретической основной выпускной квалификационной работы послужили исследования отечественных и зарубежных ученных в области молекулярных и иммунологических методов выявления вирусных инфекций, таких как Покровский В.И., Косяков П.М. и Зотиков Е.А., К. Маллиса, Е. Энгвалл, П. Перлманном, Б. Вимен, А. Шуурс.
Практическая значимость магистерского исследования позволит повысить качество проведения скрининговой диагностики донорской крови на гемотрансмиссивные инфекции.
Выпускная квалификационная работа изложена на 50 страницах. Она состоит из оглавления, введения, трех основных глав, выводов. Список ис-пользованных источников насчитывает 61 наименование. В работе исполь-зуются 7 таблиц и 6 рисунков.

Весь текст будет доступен после покупки

Глава 1. Обзор литературы

Основной задачей современной трансфузиологии является инфекционная безопасности гемотрансфузий донорской крови и ее компонентов. Наибольшую опасность среди гемотрансмиссивные инфекций представляют ВИЧ-инфекция и вирусные гепатиты В и С.
В Белгородской области, с целью обеспечения инфекционной безопасности гемотрансфузий, обследование крови доноров производится с применением диагностических систем иммуноферментного анализа и полимеразной цепной реакции, обладающих высокой чувствительностью и специфичностью и одобренных Федеральной системой внешней оценки качества клинических лабораторных исследований (ФСВОК).

Весь текст будет доступен после покупки

1. Постановление Правительства РФ № 797 от 22.06.2019 г. «Об утверждении Правил заготовки, хранения, транспортировки и клинического использования донорской крови и ее компонентов и о признании утратившими силу некоторых актов Правительства Российской Федерации».
2. Федеральный закон Российской Федерации от 20 июля 2012 г. № 125-ФЗ «О донорстве крови и ее компонентов».
3. Приказ Минздравмедпрома РФ от 30.10.95 № 295 «О введении в действие правил обязательного медицинского освидетельствования на ВИЧ-инфекцию».
4. Приказ Минздрава РФ от 4 августа 2000 г. № 311 «О мерах по повышению безопасности гемотрансфузий».
5. Приказ Минздрава РФ № 193 от 07.05.2003 г. «О внедрении в практику работы службы крови в Российской Федерации метода карантинизции свежезамороженной плазмы».
6. ГОСТР 53470-2009. Кровь донорская и её компоненты. Руководство по применению компонентов донорской крови. Дата введения 01.09.2010.
7. ГОСТР 53420-2009. Кровь донорская и её компоненты. Общие тре-бования к обеспечению качества при заготовке, переработке, хранении и ис-пользовании донорской крови и её компонентов. Дата введения 01.09.2010.
8. Адамова В. В. Статистический анализ в экологических исследованиях с применением R: учеб-метод. пособие. Белгород: ИД «БелГУ» НИУ «БелГУ», 2022. 64 с.
9. Анализ инфекционных маркеров, ассоциированных с безопасностью донорской крови / А. Б. Сатыбалдиева, Б. Карабаев, Э. А. Тилеков, Ж. А. Чынгышова // Молодой ученый. 2017. Т. 136 № 2. С. 273-282.
10. Быстрова Т. Н., Михайлова Ю. В., Сутырина О. М., Зайцев Р. М. Отечественная эпидимиология в XXI в.: приоритетные направления развития и новые технологии в диагностике и профилактике болезней человека: Тезисы докладов. СПб. 2012. 248 с.
11. ВИЧ-инфекция / А. Г. Рахманова, Е. Н. Виноградова, Е. Е. Воронин, А. А. Яковлев. СПб, 2004. 696 с.
12. Влияние современных подходов к лабораторному обследованию доноров крови и ее компонентов на инфицированность вирусом гепатита В у больных с заболеваниями системы крови / Е. Н. Игнатова, Т. А. Туполева, Е. Н. Овчинникова, Т. Ю. Романова, Н. Г. Ярославцева, Ф. П. Филатов, В. В. Троицкая, Л. А. Кузьмина, Е. Н. Паровичникова, Т. В. Гапонова // Терапевтический архив. 2017. № 11. С. 27-34.
13. Гармаева Т. Ц. Вирусные гепатиты В и С у больных заболеваниями системы крови: Автореф. дис. докт. мед. наук. Москва., 2012. 225 с.
14. Давидович М. А. ПЦР-диагностика вирусных гепатитов и ВИЧ-инфекции в службе крови Хабаровского края // Здравоохранение Дальнего Востока. 2013. Т. 56 № 2. С. 85-86.
15. Жибурт Е.Б. Надлежащая производственная практика (GMP) орга-низации службы крови. Москва. «КДУ»: «Университетская книга», 2016. 90 с.
16. Зорина В. В. Основы полимеразной цепной реакции. М.: 2012. 76 с.
17. Иммунные тесты и диагностика острой стадии ВИЧ-инфекции / З. Н. Лисицина, К. А. Дмитриевская, Н. В. Коробан, Т. В. Кондрашова // ВИЧ-инфекция и иммуносупрессии. 2017. Т. 9, № 2. С. 427-456.
18. Использование штрих-кода в переливании компонентов донорской крови / Н. В. Ткачева, Е. В. Потольянова, Н. В. Санникова, А. А. Маковский, Л. И. Бархатова // Медицинская сестра. 2017. № 3. С. 20-23.
19. Калякина В. Г. Материалы научно-практических конференций в рамках V Российского конгресса лабораторной медицины 2019 // молекулярная диагностика вирусных инфекций методом ПЦР в режиме реального времени: Сборник тезисов. 2019. С. 201-202.
20. Канавина С. С., Агапитов А. Е. Актуальные вопросы совершенствования методологии социальной и профилактической медицины // Проблемы профилактики ВИЧ-инфекции и вопросы классификации видов профилакти-ки ВИЧ-инфекции. Иркутск. Изд-во Иркутский ГМУ Минздрава России. 2019. С. 43-48.
21. Михальченко А. С., Золотавина М. Л., Братова А. В. Материалы Международной научной конференции «Биосфера и человек». Майкоп. Изд-во ООО «Электронные издательские технологии», 2019. С. 276-278.
22. Михальченко А. С., Золотавина М. Л., Братова А. В. Студенческий биохимический форум 2020. II межвузовская студенческая конференция // Обоснование выбора методов ИФА И ПЦР в диагностике вирусных инфекций. Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова» биологический факультет. Москва. 2020. С. 59-60.
23. Обеспечение вирусной безопасности донорской плазмы, использу-емой в производстве препаратов крови / Л. В. Ренева, Л. В. Волкова, А. В. Казьянин // Вестник службы крови. 2011. № 4 С. 19-23.
24. Обеспечение эффективности и безопасности переливания тромбо-цитов / М. В. Зарубин, М. Н. Губанова, Т. В. Гапонова, И. В. Парамонов, С. Р. Мадзаев, К. В. Хальзов, Ю. В. Моор, Е. Б. Жибурт // Вестник Национального медико-хирургического центра им. Н.И. Пирогова. 2016. Т. 11. № 3. С. 98–125.
25. Остаточный риск инфицирования при переливании крови / М. Н. Губанова, С. Р. Мадзаев, К. С. Аветисян, А. В. Бахметьев, М. В. Зарубин, А. В. Караваев, Е. А. Клюева, А. В. Коденев, К. В. Кузнецов, А. Р. Максимов, У. С. Султанбаев, Н. Г. Филина, К. В. Хальзов, Л. М. Яковлева, Е. Б. Жибурт // Трансфузиология. 2014. № 14. С. 13-21.
26. Предупреждение передачи вирусов гепатитов В и С при перелива-нии донорской крови и ее компонентов / А. В. Чечеткин, В. В. Данильченко, А. Б. Макеев, В. Н. Чеботкевич, М. Ш. Григорьян // Журнал инфектологии. 2016. Т. 8. № S2. С. 102.
27. Проблема ложноположительных результатов ИФА в диагностике гепатита С / О. Ю. Туманова, И. С. В. Плясунова, О. Н. Ястребова // Спра-вочник заведующего КДЛ. 2021. № 1. С. 27-35.
28. Профилактика посттрансфузионного вирусного гепатита С при пе-реливании донорской крови и ее компонентов / А. В. Чечеткин, В. В. Да-нильченко, А. Д. Касьянов, А. Б. Макеев, В. Е. Солдатенков, В. Н. Чеботке-вич // Журнал инфектологии. 2015. Т. 7. № 3. С. 85-90.
29. Рагимов А. А., Дашкова Н. Г. Основы трансфузионной иммуноло-гии. Москва: ГЭОТАР-Медиа, 2012. 280 с.
30. Рациональный подход к решению вопросов организации безопасного донорства / Н. Г. Филина, Е. П. Паникаровская, И. В. Похабова, Е. Б. Жибурт // Трансфузиология. 2012. Т. 13. № 2. С. 34–39.
31. Рекомендации по лечению ВИЧ-инфекции и связанных с ней забо-леваний, химиопрофилактике заражения ВИЧ / В. В. Покровский, О. Г. Юрин, А. В. Кравченко, В. В. Беляева, Т. Н. Ермак, В. Г. Канестрин, В. И. Шахгильдян, Н. В. Козырина, В. В. Буравцова, Р. С. Насрия, О. Н. Хохлова, А. В. Покровская, О. С. Ефремова, В. В. Коннов // Эпидемиология и инфекционные болезни, актуальные вопросы. 2018. № 6. 80 с.
32. Русанов В. М. Вирусная безопасность донорской плазмы // Вестник Службы крови России. 2008. № 2. С. 34-37.
33. Современное состояние донорства крови и ее компонентов в Рос-сийской Федерации / Е. А. Селиванов, А. В. Чечеткин, М. Ш. Григорьян, А. Б. Макеев, Л. Г. Воробей // Трансфузиология. 2012. Т. 13., №3. С 4-14.
34. Соринсон С. Н. Вирусные гепатиты. С-Пб. 1998. С. 201-245.
35. Тарасенко В. А., Ольшанский А. Я., Гукасян И. А., Тарасенко Ю. Ф., Бондаренко В. А. Обоснование проведения исследований образцов сыворотки крови доноров, не содержащих HBsAg на другие серологические маркеры вируса гепатита В для снижения риска развития посттрансфузионных осложнений / XIV междун. конфер «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии». Крым. Ялта. Гурзуф. 2006. С. 175-176.
36. Успешное лечение вирусного гепатита С даклатасвиром и асуна-превиром у двух реципиентов донорских легких / Д. Т. Абдурахманов, И. Н. Тихонов, Н. А. Мухин, В. Т. Ивашкин // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 2017. № 5. С. 65-68.
37. Характеристика современного этапа развития службы крови в Рос-сии / Е. А. Селиванов, Т. Н. Данилова, И. Н. Дегтерева, М. Ш. Григорьян, Л. Г. Воробей // Медицина экстремальных ситуаций. 2012. Т. 40. № 2. С. 71-81.
38. Эпидемиология, диагностика и лечение ВИЧ-ассоциированных не-ходжкинских лимфом / В. В. Рассохин, А. В. Некрасова, В. В. Байков, Н. В. Ильин, Ю. Н. Виноградова // ВИЧ-инфекция и иммуносупрессии. 2018. Т. 10, № 3. С. 17-29.
39. Инструкция по применению набора реагентов «ДС-ИФА-НВsAg» тест-систем иммуноферментная для выявления или подтверждения поверх-ностного антигена вируса гепатита В. 20 с.
40. Инструкция по применению набора реагентов «МилаЛаб-ИФА-АНТИ-НСV» тест-система иммуноферментная для выявления антител к ви-русу гепатита С, набор диагностический. 20 с.
41. Инструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного одновременного определения антител к ВИЧ ? и антигена ВИЧ 1 p24 ИФА-ВИЧ ?-АГ/АТ-Фактор. 20 с.
42. Инструкция по применению набора реагентов «ДС-ИФА-АНТИ-НСV-СПЕКТР-GM» тест-система иммуноферментная для выявления спектра антител класса IgG и IgM к вирусу гепатитта С и подтверждения результатов анти- НСV скрининга. 20 с.
43. Инструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного «ИФА-HBsAg-подтверждающий тест» предназначен для подтверждения специфичности результатов выявления поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) методом ИФА. 3 с.
44. Инструкция по применению набора реагентов «АмплиСенс HCV/HBV/HIV-FL» для одновременного выявления РНК вируса гепатита С (HCV), ДНК вируа гепатита В (HBV), и РНК вируса иммунодефицита чело-века (HIV) в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией. 49 с.
45. Глобальная обсерватория здравоохранения. URL: https://www.who.
int/data/gho/data/themes/hiv-aids (дата обращения: 29.03.2022 г.).
46. ВОЗ публикует инновационные рекомендации по тестированию на ВИЧ, направленные на расширение охвата лечением ВИЧ-инфекции. URL: https://www.who.int/ru/news/item/27-11-2019-innovative-who-hiv-testing-recom-mendations-aim-to-expand-treatment-coverage (дата обращения: 29.03.2022 г.).
47. ВОЗ приветствует глобальный прогресс в борьбе с вирусным гепа-титом. URL: https://www.who.int/ru/news/item/23-07-2014-who-welcomes-global-momentum-on-viral-hepatitis (дата обращения: 29.03.2022 г.).
48. Роспотребнадзор. О Всемирном дне борьбы с гепатитом URL: https://www.rospotrebnadzor.ru/about/info/news/news_details.php?ELEMENT_ID=18522&sphrase_id=4151517 (дата обращения: 29.03.2022 г.).
49. Всемирный день борьбы с гепатитом: ускорение элиминации гепа-тита B среди матерей и детей. URL: https://www.who.int/ru/news/item/27-07-2020-world-hepatitis-day-fast-tracking-the-elimination-of-hepatitis-b-among-mot-hers-and-children (дата обращения: 29.03.2022 г.).
50. Обновленная информация о семьдесят четвертой сессии Всемирной ассамблеи здравоохранения 27 мая 2021 г. URL: https://www.who.int/ru/news/
item/27-05-2021-update-from-the-seventy-fourth-world-health-assembly-27-may-2021 (дата обращения: 29.03.2022 г.).
51. R Core Team. [Электронный ресурс]. – 2021. – URL: https://www.rproject.org (Дата обращения: 30.04.2022 г.)
52. Число зарегистрированных больных с впервые в жизни установленным диагнозом ВИЧ-инфекции, на 100 000 человек. URL: https://rosstat.gov.ru/ (дата обращения 21.03.2022 г.).
53. Accelerating the elimination of viral hepatitis: a Lancet Gastroenterology & Hepatology / Cooke G. S. Andrieux-Meyer I Applegate T. L. [et al.] // Lancet Gastroenterol Hepatol. 2019. № 4. 135-184 p.
54. Global change in hepatitis C virus prevalence and cascade of care be-tween 2015 and 2020: a modelling study / Staff Polaris Observatory HCV // The Lancet Gastroenterology & Hepatology. 2022. Vol. 7. № 4 396–415 p.
55. Global elimination of hepatitis C: a warning from the data / G. Dusheiko, I. Carey // The Lancet Gastroenterology & Hepatology. 2022. Vol. 7. 380–381 p.
56. Global epidemiology and genotype distribution of the hepatitis C virus infection / Gower E., Estes C., Blach S., Razavi-Shearer K., Razavi // H. J Hepatol. 2014. № 61. S45-S57 p.
57. Global epidemiology of hepatitis C virus infection: new estimates of age-specific antibody to HCV seroprevalence / Mohd Hanafiah K., Groeger J., Flaxman A. D., Wiersma S. T. // Hepatology. 2013. № 57. 1333-1342 p.
58. Lavanchy D. The global burden of hepatitis C // Liver Int. 2009. № 29. 74-81 p.
59. Prevention of mother-to-child transmission of hepatitis B: birth-dose vaccination is not enough / Jean Jacques, Noubiap Shalom, Tchokfe Ndoula // The Lancet Global Health. 2022 Vol. 10. № 4. e455–e456 p.
60. Randomized trial of a vaccine regimen to prevent chronic HCV infection / Page K. Melia M., Veenhuis R. [et al.] // N Engl J Med. 2021. № 384. 541-549 p.
61. Zou Shimian, Stramer S. L., Dodd R. Y. Donor Testing and Risk: Current Prevalence, Incidence, and Residual Risk of Transfusion-Transmissible Agents in US Allogeneic Donations. Transf. Med. Rev. 2012. № 26. 119 – 129 p.

Весь текст будет доступен после покупки