Получение и оценка особенностей работы с диплоидной культурой клеток золотого карася для идентификации вирусов карповых

ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 Клеточные культуры, как живая система в вирусологии
1.2. Применение культур клеток
1.3. Условия культивирования клеточных линий
1.4. Вирусы и вирусные заболевания рыб, обнаруженные в России и на прилегающих к ней территориях
1.5. Вирусные инфекции рыб семейства карповые
1.6. История создания и применения клеточных культур рыб
1.7. Клеточные линии, полученные от рыб семейства карповые
ГЛАВА 2. ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Материалы
2.1.1. Источник клеток
2.1.2. Вирус
2.1.3. Питательные среды, растворы и сыворотки
2.1.4. Лабораторное оборудование и принадлежности
2.2. Методы
2.2.1. Получение первичных культур клеток плавников золотого карася
2.2.2. Изучение влияния состава питательных сред на пролиферацию
клеток
2.2.3. Оценка влияния процентного содержания сыворотки крови крс на пролиферацию клеток
2.2.4 Определение температурной динамики роста клеток плавников золотого карася
2.2.5 Проверка культуры клеток на стерильность
2.2.6. Кариологические методы
2.2.7. Вирусологические методы
2.2.8. Статистические методы
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Получение, характеристика и применение культуры клеток плавников золотого карася (Carassius auratus)
3.2. Субкультивирование первичных культур клеток
3.3. Изучение влияния состава питательных сред на пролиферацию клеток
3.4. Оценка влияния процентного содержания сыворотки крови крс на пролиферацию клеток
3.5. Определение температурной динамики роста клеточных линий
3.6. Проверка клеточных линий на стерильность
3.7. Кариологические методы
3.8. Вирусологические методы
Выводы
Заключение
Список литературы

Весь текст будет доступен после покупки

Метод культивирования клеток вне организма является большим научным достижением, так как позволяет получать наиболее объективные и надежные данные при диагностике вирусных инфекций, использовать их в биотехнологических процессах при производстве вакцин, для получения интерферона, а также при синтезе моноклональных антител [6;89].
В настоящее время в мире производятся рекордно высокие объемы продукции рыболовства и аквакультуры, и в дальнейшем вклад сектора в обеспечение продовольствия и питания будет расти.
Производство гидробионтов в Российской Федерации является составной частью сельскохозяйственного и рыбохозяйственного секторов экономики страны, однако сектор аквакультуры также уязвим ввиду эндемических и вновь появляющихся вирусных заболеваний у карповых рыб.
Россия – страна, располагающая крупнейшим в мире водным фондом внутренних водоемов и прибрежных акваторий морей. На протяжении длительного периода времени рыбохозяйственной эксплуатации внутренних водоемов не придавалось большого значения, так как производство рыбной продукции осуществлялось за счет промыслового изъятия природных популяций рыб и других гидробионтов в Мировом океане.
В 2023 году в нашей стране добыто 4,6 млн тонн, что составляет +11,2% к уровню 2022 года. По данным Центра системы мониторинга рыболовства и связи (ЦСМС — подведомственный Росрыболовству), к 1 ноября 2023 года общий объем добычи водных биоресурсов всеми российскими пользователями составил 4,6 млн тонн, что на 11,2% больше уровня аналогичного периода прошлого года [31;32].

Весь текст будет доступен после покупки

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Клеточные культуры, как живая система в вирусологии

Культура клеток - это клетки многоклеточного организма, которые сохраняют способность к делению и жизнедеятельности вне организма в искусственных условиях длительное время. Культивирование клеток представляет собой процесс, посредством которого in vitro отдельные клетки (или единственная клетка) прокариот и эукариот выращиваются в контролируемых условиях. На практике термин «культура клеток» относится в основном к выращиванию клеток, относящихся к одной ткани, полученных от многоклеточных эукариот, чаще всего животных. Историческое развитие технологии и методик выращивания культур клеток неразрывно связаны с выращиванием тканевых культур и целых органов.
Для культивирования вне организма живые клетки могут быть получены несколькими способами. Клетки могут быть выделены из крови, но к росту в культуре способны только лейкоциты. Моноядерные клетки могут быть выделены из мягких тканей с помощью таких ферментов, как коллагеназа, трипсин, проназа, разрушающих внеклеточный матрикс. Кроме того, в питательную среду можно поместить кусочки тканей и материалов.
Культуры клеток, взятых непосредственно от объекта (ex vivo), называются первичными [1;3;6]. Большинство первичных клеток, за исключением опухолевых, имеют ограниченный срок использования. После определённого количества делений такие клетки стареют и прекращают делиться, хотя могут при этом сохранить жизнеспособность.
Существуют иммортализованные («бессмертные») линии клеток, способные размножаться бесконечно. У большинства опухолевых клеток эта способность является результатом случайной мутации, но у некоторых лабораторных клеточных линий она приобретена искусственно, путём активации гена теломеразы.

Весь текст будет доступен после покупки

1. Архангельский, Д.С. Получение первичных культур клеток из гонад судака для вирусологических исследований/ Д.С. Архангельский, О.В. Полякова// Биол. основы рыбных хозяйств, водоемов Средней Азии, Казахстана. - Фрунзе, 1978. - С. 244-245.
2. Бакина, А. В. Анализ темпа роста золотого карася оз. Андреевское Тюменского района / А. В. Бакина, Н. В. Смолина, Ю. А. Веселов // Интеграция науки и образования в аграрных вузах для обеспечения продовольственной безопасности России : сборник трудов национальной научно-практической конференции, Тюмень, 01–03 ноября 2022 года. – Тюмень: Государственный аграрный университет Северного Зауралья, 2022. – С. 6-16.
3. Биология клетки в культуре. Отв. редактор А.С.Трошин, // Ленинград, «Наука»., 1984 г.
4. Васильев, В.П. Эволюционная кариология рыб / В.П. Васильев. - М.: Наука, 1985.-300 с.
5. Весенняя виремия карпов / Т.Д. Пичугина, М.Н. Борисова, Е.А. Завьялова [и др.] // Ветеринария. —2004. — № 5. — С. 28–30.
6. Животная клетка в культуре (Методы и применение в биологии) под ред. Л.Д. Дьяконова и В.И. Ситькова - М.: Компания Спутник, 2000. - С. 148-158.
7. Завьялова Е.А. Цитоморфологическая характеристика культур клеток рыб и их чувствительность к некоторым вирусам: автореф. дис. … канд. биол. наук. — М., 2006. — 25 с.
8. Лага, В. Ю. Опыт адаптации субкультуры эмбриональных клеток горбуши к повышенной температуре / В. Ю. Лага, Е. И. Ярыгина, Ю. Р. Савельева // Актуальные проблемы ветеринарной медицины, зоотехнии, биотехнологии и экспертизы сырья и продуктов животного происхождения : Сборник трудов 2-й Научно-практической конференции, Москва, 23 июня 2023 года / Под общей редакцией С.В. Позябина, Л.А. Гнездиловой. – Москва: Сельскохозяйственные технологии, 2023.
9. Методические рекомендации по отбору проб для вирусологического исследования на обнаружение вирусов геморрагической септицемии, инфекционного некроза гемопоэтической ткани лососевых, инфекционного панкреатического некроза, весенней виремии карпа / В.А. Пыльнов, С.С. Рыбаков, Н.В. Мороз; ФГБУ «ВНИИЗЖ». — Владимир, 2013. — 17 с.
10. Миядзаки Т., Ишики Т., Кацуюки Х.// Гистопатологические и электронно-микроскопические исследования сонной болезни кои Cyprinus carpio koi в Японии.// Дис. Акваторган 65:197-207 – 2005.
11. Мониторинг эпизоотической ситуации по болезням рыб: факты и перспективы / Е. А. Завьялова, А. Е. Дрошнев, К. Ю. Булина, М. А. Карпова // Труды Всероссийского НИИ экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко. – 2018. – Т. 80, № 1. – С. 182-189.
12. Мониторинг эпизоотической ситуации по болезням рыб: факты и перспективы / Е. А. Завьялова, А. Е. Дрошнев, К. Ю. Булина, М. А. Карпова // Труды Всероссийского НИИ экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко. – 2018. – Т. 80, № 1. – С. 182-189.

Весь текст будет доступен после покупки