Изучение ДНК-полиморфизма в гене дофамина у кур Пушкинской породы

Введение 3
Глава 1. Обзор литературы по теме исследования 5
1.1. Пушкинская порода кур: характеристика и методы разведения 5
1.2. Маркерная технология и селекция 5
1.2.1. Генетический полиморфизм и молекулярно-генетические маркеры 5
1.2.2. Современные методы идентификации полиморфных участков ДНК 20
1.2.3. Основные направления использования молекулярных маркеров 26
1.2.4. Методы селекции, основанные на использовании ДНК-маркеров 30
1.2.5. Ошибки генотипирования 34
1.3. Ген дофамина, как маркер для хозяйственно-полезных признаков 38
Глава 2. Материалы и методы исследования 41
2.1. Материалы и оборудование 41
2.2. Методы исследования 41
2.3.1. Выделение геномной ДНК 42
2.3.2. ПЦР-амплификация 46
2.3.3. Электрофорез в агарозном геле 51
2.3.4. Детекция амплификатов и статистическая обработка данных 54
Глава 3. Результаты исследования. Характеристика полученных полиморфизмов. 57
Заключение 60
Список использованных источников 62
Приложение 70

Весь текст будет доступен после покупки

Исследования в современном птицеводстве все более сосредоточены на генетических аспектах селекции. Благодаря стремительному развитию технологий секвенирования и появления инновационных методов, геном домашней курицы на данный момент хорошо изучен [40]. Существуют базы данных, содержащие информацию об отдельных генах, структурах повторяющихся последовательностей, однонуклеотидных заменах, что позволяет более эффективно проводить исследования из любой точки мира.
Выявление различных полиморфизмов, связанных с хозяйственно-полезными признаками у птиц, является одним из важнейших инструментов в селекционной работе [11]. Благодаря использованию для анализа полиморфных ДНК-фрагментов, удалось получить данные о гетерогенности различных пород и популяций сельскохозяйственной птицы [15]. Для кур характерна быстрая смена поколений, поэтому метод генотипирования по генам, отвечающим за продуктивные качества, позволяет повысить эффективность селекции и получить результат в течение незначительного времени [17]. Особенно актуальными считаются исследования по выявлению генетического полиморфизма в генах, напрямую связанных с яйценоскостью и формированием мышечной массы кур, каким является ген рецептора D2 дофамина DRD2, расположенный у кур на 24 хромосоме. В данном гене обнаружен indel-полиморфизм, оказывающий влияние на мясную продуктивность кур [11].

Весь текст будет доступен после покупки

Глава 1. Обзор литературы по теме исследования
1.1. Пушкинская порода кур: характеристика и методы разведения
Пушкинская яично-мясная порода была выведена на основе поглотительного скрещивания австролорпов черно-пестрых с белыми леггорнами в вводных скрещиваниях с московскими белыми и цветными петухами 4-линейных гибридов мясного кросса «Бойлер-6». Порода утверждена в 2007 году с живой массой кур 2,2 кг, петухов 2,7 кг и яйценоскостью 200 яиц за 60 недель жизни с массой 61 г (белая окраска скорлупы) [35]. Птица имеет уникальную окраску покрова. Куры полосато-пестрые с белым подпухом, петухи белые со следами полосатости, кожа ног и подкожного жира белые. Ушные мочки бело-розовые, форма гребня розовидная (82%) и листовидная (18%) [34]. К возрасту 7-9 недель птица приобретает характерную окраску оперенья [14].
Долгое время в породе велась селекция на увеличение живой массы, отразилось на параметрах экстерьера птицы: к 2015 году куры достигли живой массы 2,3 кг, а племенные петухи 3,1 кг. Основным методом разведения является свободно-групповое спаривание – панмиксия, ограниченная отбором и подбором [17, 34]. Пушкинская порода кур обладает универсальным типом продуктивности (яично-мясная) [11], поэтому при разведении учитывается перспективность её использования в приусадебном и фермерском птицеводстве, где популярна птица комбинированной продуктивности [35].
1.2. Маркерная технология и селекция
1.2.1. Генетический полиморфизм и молекулярно-генетические маркеры
Генетический полиморфизм – разная вариация генов (poly – много, morpho – форма) [12]. Область молекулы ДНК, несущая информацию о первичной структуре белка или РНК, называется геном, в то время как полный набор генов в клетке, органелле или вирусе называется геномом. У млекопитающих гены находятся в хромосомах, где их сосредоточено десятки и сотни тысяч [2]. Место, где расположен ген на хромосоме, называется локусом.
Для каждого генетического локуса характерен определенный уровень изменчивости, который заключается в наличие нескольких вариантов генов (аллелей) у разных особей. Различные варианты процессинга могут увеличить число белков в клетке по отношению к числу генов. А изменения в последовательности ДНК (мутации) могут привести к возникновению альтернативных вариантов генов. Если мутация встречается с частотой более 1,5-3% и не приводит к явным фенотипическим проявлениям заболевания, она рассматривается как полиморфизм [5]. Таким образом, наличие в популяции нескольких аллелей одного локуса, называется генетическим полиморфизмом.

Весь текст будет доступен после покупки

1. Баранов В. С. Полиморфизм генов, экогенетические болезни и генетический паспорт. // Экологическая генетика. 2011. №3. С. 3-14.
2. Богданова Т. Л., Солодова Е.А. Биология: Справочник для школьников и поступающих в вузы. Курс к подготовке к ГИА, ЕГЭ и дополнительным вступ. Испытаниям в вузы. Москва: АСТ-ПРЕСС ШКОЛА, 2017. 816 с
3. Волкова Р. А., Сколотнева Е. С., Эльберт Е. В., Мыца Е. Д., Меркулов В. А., Бондарев В. П., Борисевич И. В. Прямые и косвенные методы определения нуклеотидного состава ДНК последовательностей микроорганизмов. // Биопрепараты. 2015. №2. С. 9-14.
4. Гончаренко Г. Г. Основы генетической инженерии. Методическое пособие. Гомель: УО «ГГУ им. Ф.Скорины», 2003. 118 с.
5. Диткина Е. Ю., Вашукова Е. С., Глотов А. С., Иващенко Т. Э. Методы диагностики полиморфизма генов метаболизма липидов человека. // Известия Санкт-Петербургского государственного технологического института (технического университета). 2012. №15. С. 68-74.
6. Календарь Р.Н., Глазко В.И. Типы молекулярно-генетических маркеров и их применение. // Физиология и биохимия культурных растений. 2002. №4. С. 279-296.
7. Канукова К. Р., Газаев И. Х., Сабанчиева Л. К., Боготова З. И., Аппаев С. П. ДНК-маркеры в растениеводстве. // Известия Кабардино-Балкарского научного центра РАН. 2019. №6. С. 220-232.
8. Костюк С.А. Секвенирование - методы расшифровки нуклеотидной последовательности ДНК. // Медицинские новости. 2017. №6. С.18-21.
9. Краснов Я. М., Гусева Н. П., Шарапова Н. А., Черкасов А. В. Современные методы секвенирования ДНК (обзор). // Проблемы особо опасных инфекций. 2014. №2. С.73-79.

Весь текст будет доступен после покупки